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凝膠色譜柱分析中凝膠與溶質(zhì)分子之間原則上不會(huì)發(fā)生任何作用,因此在一次分離后用流動(dòng)相稍加平衡就可以運(yùn)行下一次的色譜操作。但在實(shí)際應(yīng)用中常有一定的污染物污染凝膠。對(duì)已沉積于凝膠床表面的不溶物可把表層凝膠曲調(diào),在適當(dāng)增補(bǔ)一些新的溶漲膠,并運(yùn)行重新平衡處理;如果整個(gè)柱有微量污染,可用0.5molNaCl溶液洗脫。在通常情況下,一根凝膠柱可使用半年之久。
凝膠色譜柱若經(jīng)多次使用后,其色澤改變,流速降低,表面有污漬等就要對(duì)凝膠運(yùn)行再生處理。凝膠的再生是指用恰當(dāng)?shù)姆椒ǔツz中的污染物,使其恢復(fù)其原來(lái)的性質(zhì)。交聯(lián)葡萄糖凝膠廠用溫?zé)岬?.5mol/L氫氧化鈉和0.5mol/L的氯化鈉和混合液浸泡,用水沖洗到中性;而對(duì)于聚丙烯酰胺和瓊脂糖凝膠由于遇酸堿不穩(wěn)定,則常用鹽溶液浸泡,然后用水沖到中性。
凝膠色譜柱存儲(chǔ)
經(jīng)常使用的凝膠以濕態(tài)保存為主,為了避免凝膠床染菌,可加少許氯仿、苯酚或硝基苯等化學(xué)物質(zhì),它可以使色譜柱放置幾個(gè)月至一年。凝膠的干燥應(yīng)先對(duì)凝膠運(yùn)行浮選,除去細(xì)小的顆粒,并用大量水洗,除去鹽和污染物,然后逐步增加一春濃度使凝膠收縮,在60~80度干燥,在整個(gè)操作過(guò)程中的蒸餾水、器皿和房間必須干凈。瓊脂糖凝膠的干燥操作比較麻煩,并且干燥后還不容易溶張,所以一般仍以濕態(tài)保存為主。
PW系列凝膠色譜柱的填料是親水而剛性,多孔球型,化學(xué)和機(jī)械性能都非常優(yōu)異的聚合物。適用于以凝膠色譜的模式碳硫分析儀分離蛋白質(zhì)、多肽、多糖、寡糖、DNA、RNA、水溶性的有機(jī)聚合物和其他水溶性大分子樣本等。PW系列色譜柱的PH適用范圍為2-12,可使用含有50%的混合有機(jī)溶劑為流動(dòng)相,使用溫度可達(dá)80℃(TSK-gel G-DNA-PW為50℃)。盡管大多數(shù)的PW填料呈微弱的負(fù)電性(約5~8μ eq/mL),但是對(duì)于碳硫分析儀分離非離子、陰離子和大多數(shù)的陽(yáng)離子型樣本沒(méi)有任何影響。因?yàn)镻W填料具有非常寬的分離范圍,更加線性的校正曲線以及比SW色譜柱更加低得多的吸附特性,所PW色譜柱經(jīng)常用于分離水溶性的合成聚合物。
相對(duì)而言,SW色譜柱適合于碳硫分析儀分離單分散性的陶粒濾料大分子,如蛋白等,而PW色譜柱則更加適合于如多糖和合成聚合物等多分散性樣本的碳硫分析儀分離。