C4反相色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在乙腈-水中的；由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中固定相可能會(huì)干掉，這會(huì)引起鍵合相的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化。因此，新的色譜柱在用來(lái)分析樣品之前，請(qǐng)一定要充分平衡色譜柱。
C4反相色譜柱的平衡方法是：以純乙腈或甲醇作流動(dòng)相，首先用低流速0.2ml/min將色譜柱平衡過(guò)夜（請(qǐng)注意斷開(kāi)檢測(cè)器?。?，然后，將流速增加到0.8mL/min沖洗30min以便將色譜柱的填料充分平衡至*狀態(tài)。平衡過(guò)程中，將流速緩慢地提高直到獲得穩(wěn)定的基線，這樣可以保證色譜柱的使用壽命，并且保證在以后的使用中，獲得分析結(jié)果的重現(xiàn)性。請(qǐng)一定確保所使用的流動(dòng)相和乙腈-水互溶。如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意首先用20倍柱體積的5%的乙腈-水流動(dòng)相“過(guò)渡”，然后使用分析樣品的流動(dòng)相直至得到穩(wěn)定的基線。
對(duì)于正相色譜柱來(lái)講，硅膠柱或極性色譜柱需要更長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)平衡。這些色譜柱在出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的，如果極性色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相，請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡。C4反相色譜柱當(dāng)使用乙醇、異丙醇、乙酸等粘度大的流動(dòng)相時(shí)，色譜柱的平衡時(shí)間要延長(zhǎng)，甚至要加倍。
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